蘆薈組織培養快速繁殖技術

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蘆薈是百合科蘆薈屬多年生常綠多肉質草本植物。近年來,由于蘆薈化學及藥理學研究的深入,巳形成了一股世界性的蘆薈保健熱。蘆薈的栽培產業也已開始在我國興起,但由于蘆薈不能自花授粉結實,因此,用種子繁殖非常困難。目前的繁殖方法主要是分株和分蘗,但難以快速、大量地繁殖種苗,這也是當前蘆薈種苗昂貴的重要原因之一。本文介紹一種對蘆薈莖尖進行組織培養快速繁殖試管苗的技術,利用這項技術可在短期內繁殖上百萬株的種苗,具有成本低,效益高的特點。

 一、材料和培養基

l0-l5cm高的蘆薈幼苗;愈傷組織誘導培養基為MS+(1一6mg/L)BA+(0.1一0.5mg/L)NAA;分化培養基為MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA;生根培養基為MS+(0.1一0.5mg/L)IBA+(2一5mg/L)PP33。

二、繁殖方法

(一)愈傷組織培養將準備好的蘆薈幼苗在清水中沖洗數次,剪去葉片和大部分莖段,取莖尖部分,再沖洗1-2次,淋干。在超凈臺上,先用75%的乙醇將莖尖浸泡30-60s,再用升汞浸5-l0min,最后用無菌水沖洗數次。用解剖刀取出包括莖尖生長點的組織切塊,接種到愈傷組織誘導培養基上。培養條件為:每天光照10-12h,光照度為1000一2000Lx,溫度(25士)2℃。大約15-25d后,試管中接種的外植體就可以膨大,形成愈傷組織。愈傷組織的形成標志著接種的外植體的生長狀態已脫離分化狀態,開始重新恢復分生能力。愈傷組織形成1周后,就可將愈傷組織轉管進行繼代培養或分化培養。

(二)繼代培養將愈傷組織在無菌條件下,從試管中取出,用鑷子和解剖刀剔除附著在愈傷塊上的培養基,并用無茵水反復清洗數次,直至愈傷塊上無殘留培養基為止。用解剖刀將愈傷塊切成數個小塊,再接種到裝有愈傷組織誘導培養基的三角瓶中,在與誘導愈傷組織相同的培養條件下繼續培養。幾天后,三角瓶中的小愈傷塊即可逐漸長大,這一過程稱作繼代培養,可反復操作。通過愈傷組織的繼代培養,原來接種的1個蘆薈莖尖組織可繁殖出大量的新接種材料來,用于分化培養。

(三)分化培養將愈傷組織在無菌條件下,從試管或三角瓶中取出,用無菌水洗凈,切成小接種塊,接種到裝有分化培養基的三角瓶中,分化培養的條件同愈傷組織培養。大約30-50d后,愈傷組織就可分化出芽,并繼續長出小葉片。當分化出的幼苗長到一定高度或分化出一定數量后,將這些小幼苗在無菌條件下取出,進行生根培養或重新誘導分化。

(四)生根培養當三角瓶中的幼苗葉片長到3cm左右時,將幼苗在無菌條件下取出,放入裝有生根培養基的三角瓶中培養,培養條件同分化培養。大約半個月后,幼苗即可生根。

(五)煉苗當幼苗的根長到一定長度,幼苗形體已顯健壯時。將幼苗取出,在清水中洗除附著在根上的培養基(注意:一定要嚴格洗凈,否則會爛根)。將洗凈的幼苗排好,用清水噴濕,在15-25℃、濕度60%-80%的條件下煉苗24h,也可視情況縮短為l2h。

(六)移栽煉苗后,將幼苗移栽入由蛭石組成的馴化苗圃中馴化,每天定期給幼苗噴施馴化培養液和清水,大約15-20d后,視幼苗長勢,即可移栽到苗圃中。

三、注意事項

1、配制培養基時,要嚴格精確地稱取各種化學試劑。培養基中的蔗糖可用市售白糖來替代,從而降低成本。高壓滅菌條件為120℃,1.5kg/cm2,3Omin。每次接種前都要對接種室進行甲醛熏蒸和紫外線滅菌。

2、在培養中,如果出現雜菌污染,應立即將該污染試管或三角瓶中的培養物倒掉并將試管或三角瓶洗凈,烘干備用。對于愈傷組織或試管苗長勢良好,僅有局部雜菌污染的試管或三角瓶,也可在無菌條件下,將愈傷組織或試管苗取出,重新放入裝有相應培養基的試管或三角瓶中,繼續培養。

3、煉苗后,也可先將試管苗浸泡在溶解有生根粉的清水中1-2h,再移栽到馴化苗圃中。在馴化過程中,除要注意環境濕度、溫度和光照外,還要注意防止各種病蟲害的發生。蘆薈的蟲害主要是紅蜘蛛和蚜蟲,可噴施40%的氧化樂果乳油1200倍液防治。蘆薈的病害主要是黑斑病,可噴施50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液防治。

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